打开APP

Nat Biotechnol | 王潇/刘如谦合成具有核酸外切酶抗性的枝状poly(A)尾,提高mRNA药物稳定性

来源:生物探索 2024-03-26 09:37

该研究提供了一种可推广的方法,将定义的但不同的修饰引入到poly(A)尾部,并表明这些化学和拓扑模式被mRNA翻译机制很好地耐受。

麻省理工学院化学系/博德研究所王潇及刘如谦(David R. Liu)等团队(陈泓宇为论文的第一作者)合作在Nature Biotechnology在线发表题为“Branched chemically modified poly(A) tails enhance the translation capacity of mRNA”的研究论文,该研究设计并合成了具有多个合成poly(A)尾的拓扑和化学修饰的mRNA,用于增加mRNA蛋白表达的持续时间和水平。

 

该研究表明,优化后的多尾mRNA在细胞转染后24 - 72小时的发光信号是对照mRNA的4.7 - 19.5倍,在体内转染后14天的可检测信号是对照mRNA <7天的可检测信号。进一步在小鼠肝脏中以最小mRNA剂量实现了临床相关基因Pcsk9和Angptl3的高效多路基因组编辑。综上所述,这些结果提供了一种可推广的方法来合成具有显著增强翻译能力的带帽分支mRNA。

 

图片

 

信使RNA (mRNA)疗法最近因其可编程性、可扩展性和易于设计和合成而备受关注,2019年冠状病毒病(COVID-19) mRNA疫苗的快速发展证明了这一点。例如,mRNA已在早期临床试验中用于产生旁分泌血管内皮生长因子(一种用于治疗心力衰竭的蛋白质)和用于纠正导致杂合性家族性高胆固醇血症的突变的Cas9蛋白。用于酶替代、抗体治疗和基因编辑等应用的mRNA治疗需要持续的高水平蛋白质生产,但传统的mRNA药物存在RNA不稳定和低表达效率的问题,需要高剂量,可能导致细胞毒性。为了应对这些挑战,有必要努力提高mRNA载体的翻译持续时间和整体蛋白质产量。

 

为了扩大mRNA药物的应用范围,人们做出了许多努力。用N1-甲基伪尿嘧啶(m1 ψ)替代尿嘧啶(U)通过阻断toll样受体识别降低免疫毒性。非翻译区(UTRs)的密码子优化和序列操作已被证明可以增加蛋白质表达。一种有望扩大mRNA药代动力学窗口的策略是使用环状RNA (circRNA),它对外切酶切割具有抗性,而外切酶切割是线性mRNA降解的主要途径。然而,circRNA技术在目前的状态下面临着一些限制。circRNAs的翻译起始依赖于内部核糖体进入位点(IRES),其效率低于7-甲基鸟苷酸(m7G)帽依赖的翻译起始机制。

 

circRNA限制了化学修饰的使用,包括m1 ψ,因为它们阻断了circRNA合成所需的RNA剪接,并消除了基于IRES的翻译起始。类似的限制适用于自我扩增的RNA,其中复制响应保守序列元素与m1 ψ和生成的复制子是无帽的,具有免疫原性。因此,需要其他策略来保护mRNA转录物免受核酸外切酶依赖的快速衰变,特别是3' poly(A)尾部的死基化,同时保留有效的帽依赖翻译起始机制。

 

图片

支链化mRNA的合成及筛选流程(Credit: Nature Biotechnology)

 

在最广泛接受的帽依赖翻译机制模型中,限速步骤是真核翻译起始因子(eIF4E和eIF4G24)组装以m7G帽为中心的翻译起始复合物。翻译起始复合物通过eIF4G与细胞质poly(A)-binding protein (PABPCs)的相互作用进一步稳定,后者识别3 ' poly(A)尾部,形成多聚体复合物和闭环结构。PABPCs具有双重作用,通过与eif结合启动翻译,并通过掩盖poly(A)尾部以防止死乙烯化来延长mRNA的稳定性。

 

之前已经证明,在poly(A)尾部引入位点特异性的抗外切酶修饰,可能通过稳定新生的poly(A)尾部和维持poly(A) -PABPC1相互作用,有效地增加了纤维素中mRNA的稳定性和蛋白质的产生。结构研究表明,PABPC1是一种多聚体蛋白复合物,其中单个PABPC1分子结合poly(A)尾部形成稳定的宏观结构。

 

为了实现上述目标,作者开发了具有多聚(A)尾部的化学修饰,帽状,分支的mRNA寡核苷酸偶联物,称为多尾(multitail) mRNA。系统地评估了poly(A)尾部不同的化学和拓扑模式对mRNA翻译能力的影响及其作用机制。已经在细胞系和小鼠中成功构建了可延长蛋白表达长达14天的支链mRNAs,并在最小剂量下提高了聚集规律间隔短回文重复(CRISPR)编辑效率。从RNA生物化学的更广泛的角度来看,该研究提供了一种可推广的方法,将定义的但不同的修饰引入到poly(A)尾部,并表明这些化学和拓扑模式被mRNA翻译机制很好地耐受。

版权声明 本网站所有注明“来源:生物谷”或“来源:bioon”的文字、图片和音视频资料,版权均属于生物谷网站所有。非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,否则将追究法律责任。取得书面授权转载时,须注明“来源:生物谷”。其它来源的文章系转载文章,本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,转载内容不代表本站立场。不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。

87%用户都在用生物谷APP 随时阅读、评论、分享交流 请扫描二维码下载->